基因文庫平臺是由生命科學聯合中心資助的非儀器類平臺，歸屬清華大學生物醫學測試中心共享儀器平臺管理，位于生物技術館1-102A室，自2014年5月正式對校內師生提供開放服務。基因文庫平臺主要提供human和 mouse全基因組shRNA干擾文庫及CRISPR基因編輯文庫，為清華大學基因編輯相關研究的課題組提供便利和支持。

RNA干擾技術是為哺乳動物細胞功能基因組研究而開發的，作為基礎生物學研究和藥物開發的有力工具，受到了研究人員的青睞。基因文庫平臺的shRNA干擾文庫覆蓋人類和小鼠全基因組，擁有46,802個基因，247,661個克隆。40%的基因干擾效率通過了高通量以及高內涵篩選的驗證，可以穩定轉染或瞬時轉染、用于轉導的病毒顆粒、整合后長期干擾抑制、轉導幾乎所有的細胞類型等優點。每個基因有3-5個shRNA克隆，至少有一個克隆干擾效率能達到70%，較少脫靶效應，滿足科研用戶的絕大需求。

CRISPR基因編輯文庫由SANGER HUMAN和 MOUSE CRISPR LIBRARY（GLY）組成，含克隆75,040個，基因數37,520個。基于優化的Sanger慢病毒載體，CRISPR基因編輯文庫在難轉染細胞系中仍能獲得高效穩定的基因敲除，嘌呤霉素篩選標記和BFP標簽有效簡化篩選流程和提高篩選效率，極高的剪切效率使得其在基因篩選、功能基因的大規模敲除、構建轉基因干細胞、核苷酸檢測等方面得到廣泛應用。

基因文庫平臺所有樣本以甘油菌形式保存，日常由專業人員運行和維護，根據課題組的需求可在最短時間內提供列表中所涵蓋的文庫材料，其目的及意義旨在保證高效、特異結果的基礎上，降低用戶的時間成本和經濟成本。

一、 文庫列表

1. Custom Glycerol-human shRNA library（人類全基因組shRNA干擾文庫）

2. Custom Glycerol-mouse shRNA library（小鼠全基因組shRNA干擾文庫）

二、 基因及克隆數量

備注：在我們提供的文庫總表中已標記了某個克隆是否已被驗證。

三、 載體信息

TRC1.5 Vector：pLKO.1-puro Vector

TRC2 Vector：TRC2-pLKO-puro Vector

四、 病毒包裝系統

目前實驗室采用的病毒包裝質粒是：pΔ8.9，Vsv-G和shRNA plasmid。產毒用的細胞是293FT。供大家參考。平臺暫無法提供病毒包裝質粒。

五、Control信息

注： TRC1.5 control對TRC1.0同樣適用。

關于shRNA干擾文庫更詳細的介紹見網址：http://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/life-science/functional-genomics-and-rnai/shrna.html。

一、 文庫列表

1. SANGER HUMAN CRISPR LIBRARY, GLY

2. SANGER MOUSE CRISPR LIBRARY, GLY

3. 亞文庫參考表單

注：CAS9PROT需自行訂購，網址參考：https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/espcas9pro?lang=zh®ion=CN。

五、  Control信息

如下三種不同的陰性對照質粒的載體同本文庫中的慢病毒載體 (LV04 vector)一致。三者的區別是僅gRNA序列不同，序列信息如下。三個gRNA 均不靶向人、小鼠和大鼠的任何基因。

關于CRISPR基因編輯文庫更詳細的介紹見網址：https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/technical-documents/technical-article/genomics/advanced-gene-editing/crispr-clone-control-and-cas9-essentials。

1. 使用人在平臺提供的文庫總表中找出所需的克隆信息并E-mail至gxyq@mail.tsinghua.edu.cn；同時填寫文庫使用申請單并打印簽字后交給管理員；
2. 由管理員找出克隆給使用人（每個克隆提供約0.5ml的菌液）；
3. 定期由基因文庫平臺負責和各課題組結算。