利用流式細胞儀測細胞凋亡(Apoptosis) Annexin V/PI染色法
正常細胞的表面由不對稱分布在質膜內葉和外葉上的脂質組成。這些脂質之一磷脂酰絲氨酸(PS),通常僅分布于質膜的內葉,因此僅暴露于細胞質中。然而,在細胞凋亡過程中,脂質不對稱性消失并且PS暴露在質膜的外部小葉上。 Annexin V是一種36 kDa的鈣依賴性的磷脂結合蛋白,能夠與PS結合。因此,熒光標記的Annexin V可用于檢測暴露于早期凋亡細胞外部的PS。Annexin V還可以染壞死細胞,因為這些細胞的膜破裂,使Annexin V可以進入整個質膜,但是Annexin V就無法區分壞細胞死(中晚期凋亡細胞)和早期凋亡細胞。因此,通過與碘化丙啶(PI)共染色,可以將凋亡細胞與壞死細胞(中晚期凋亡細胞)區分開,因為早期凋亡細胞和活細胞的細胞膜仍然完整,PI能進入壞死細胞(中晚期凋亡細胞)但是被早期凋亡細胞排除在外。該方案描述通過Annexin V結合和PI攝取,然后通過流式細胞儀檢測和量化凋亡細胞。
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