一、步驟：

1. 取新鮮的足夠小的樣品立刻置于pH=7.2的固定液（含2%PFA和2.5%的戊二醛的混合液）中，4°C過夜或者室溫固定2h以上。
2. 0.1M的PB緩沖液沖洗樣品3次，10min/次。
3. 1%餓酸后固定1h。
4. 0.1MPB緩沖液沖洗3次，10min/次。
5. 梯度酒精脫水，50%，70%，80%，90% 10min，100%酒精3次，10min/次。
6. 酒精：丙酮=1:1   10min。
7. 丙酮  10min。
8. 丙酮：812樹脂 =1:1  2h，RT
9. 丙酮：812樹脂 =1:2  2h，RT
10. 丙酮：812樹脂 =1:3  2h，RT
11. 樹脂過夜。
12. 更換新鮮樹脂8h。
13. 包埋樣品，RT靜置4h。.
14. 37°C過夜。
15. 60°C24h。
16. 制作超薄切片。
17. 電鏡觀察拍照。
二、注意事項：
1. 如有條件對實驗動物用混合固定液（（含2%PFA和2.5%的戊二醛的混合液）進行灌流（perfusion fixation），或者在低溫環境下用鋒利的切割器械迅速取材。
2. 動作迅速：組織離體后應盡快將其快速放入化學固定液內，使組織和細胞盡可能保持原來的生活狀態。
3. 減少損傷：選擇鋒利切割器械，避免或盡量減少牽拉或擠壓組織。
4. 組織塊大小：為使組織得到均勻而充分固定，所取材料應小于1mm3。
5. 低溫操作：為減少對組織細胞酶活性的破壞，最好在4℃下操作，所用容器、器械及固定液均需要預冷。在血液供給停止后，防止組織和細胞內各種酶的作用使組織發生自溶，降解組織中蛋白、核酸等主要成分。
6. 需要定位樣品請與相關人員咨詢特定取材方式。
常見樣品脫水時間：
細胞8min
組織10min,若較嫩為8min
細胞器2min
脂肪8min或＜8min
葉片15min
根15min
藻類15min
菌10-15min
以上均為常規注意事項，送樣之前和送樣時請與相關人員當面進行溝通，然后選擇適合的處理方法。