細胞生物學平臺掃描電鏡樣品處理需要哪些流程及注意事項?
2013/02/016964
一、流程:
1. 樣品置于pH=7.2的固定液(含2%PFA和2.5%的戊二醛的混合液)中,固定1h左右或4°C過夜。
2. 0.1M的PB(pH7.2-7.4)緩沖液沖洗樣品3次,10min/次。
3. 1%鋨酸(in 0.1M PB)后固定1h。
4. 純凈水沖洗3次,15min/次。
5. 梯度酒精脫水,30%,50%,70%, 95% 10min,100%酒精3次,10min/次。
6. 臨界點干燥。
7. 將干燥后的樣品用雙面碳膠帶粘到樣品臺上。
8. 金屬鍍膜。
9. 電鏡觀察拍照。
二、注意事項:
步驟1-4應在通風櫥里進行,樣品在制備過程中要不停搖動,可以放在搖床上。
如果用戶沒有做電鏡樣品的經驗,強烈建議在設計實驗的時候就與電鏡機組先咨詢。送樣之前和送樣時需要與機組人員詳細溝通。
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