作者：曹慧珍 

很多時候，Z-序列需要和多點或時間序列連用，但這時會遇到很多問題！ 

我們想象中樣品是整齊的排列在小皿里 

直接設定Top、Bottom、Step，ND窗口中勾選Z、XY、T，Run Now開始采集圖像就好啦。 

但是樣品通常長這樣： 

樣品在小皿上的高度并不相同，如果直接設定Top、Bottom，采集的厚度將會翻倍，浪費大量時間。 

另一種Z軸范圍選定方法就發揮作用了 

1、ND Acquisition窗口XY選項卡下記錄樣品的XYZ信息（Z需要是3D stack的中間面）； 

2、ND Acquisition窗口Z選項卡下勾選黃色漏斗狀圖標； 

3、設定樣品step和總厚度； 

4、點擊run now開始采集圖像序列。 

樣品的總厚度和每個點的中間焦面可通過設定top和Bottom的方法獲得，立方體中間的數值即中間面。 

這種方法工作原理：先到達記錄的XYZ位置，根據中間面Z計算出三維序列的起始面，開始采集三維序列，然后到達另一個XYZ位置，計算出新的Z軸起始面，采集另一個三維序列，循環往復。 

還有的樣品更任性： 

樣品不止在小皿上的高度不同，它們自己的厚度也相差很大，這時候用上面的方法拍，range需要由最厚的樣品決定，比較浪費時間， 

NIS-element有終極武器ND Sequence Acquisition 

1、鼠標右擊軟件上的空白部分，從彈出的菜單中選擇[Acquisition Controls] -> [ND Sequence Acquisition]以調出對話框。 

2、點擊add添加一個ND程序，新彈出一個類似ND Acquisition的窗口 

3、XY選項卡下記錄位置信息，Z選項卡下按照top、bottom的方法或找中間面的方法設定Z軸掃描范圍； 

4、點擊OK； 

5、回到ND Sequence Acquisition主窗口，add添加另外的ND程序，多次重復此步驟； 

6、勾選[Time lapse]設定時間序列； 

7、run now啟動程序。 

有過細胞timelapse拍攝經驗的小伙伴都知道，細胞會發生熱漂移現象，必須打開PFS系統才能實現長時間的拍攝，XY選項卡下記錄每個點的鎖焦面，以該面作為relative去采集多點三維時間序列，然而細胞往往是貼壁的，鎖焦面通常是細胞中信號最為清晰的焦面，而非中間面。 

這個時候我們可以選擇另一種方式設定Z軸掃描范圍，先調焦確定最清晰的焦面（鎖焦面）和top/bottom之間的距離，然后打開PFS，XY選項卡下記錄位置焦面高度信息，Z選項卡下，分別設定向上向下掃描厚度，然后設定step，開始ND程序采集。 

XY-Z-T程序略復雜，大家有需求可以預約輔助實驗哦！ 

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