作者：曹慧珍

能看出左圖是楊桃嗎，感覺和中間的海星是親戚吧！看右面楊桃的圖，就不會有這樣錯誤認知了吧。如果是一個可旋轉的圖，從各個角度觀察模型，我們是不是對它認識的更清晰！

觀察尺度縮小千萬倍 

我們在顯微鏡下觀察樣品結構時，每一張XY的平面圖看到的都只是在該焦面和特定角度看到的圖，很容易造成視覺錯覺，丟失真實的樣品信息。

XY二維圖片觀察相交的兩條微絲，空間上沒有交點。 

所以說為了更精準的實驗結果，我們需要采集三維圖像。

三維圖像采集方法 

1、按照采集二維圖像的方法，先調整好針孔、Laser、HV、Scan size/speed等參數，決定圖像的獲取條件。 

2、在ND Acquisition窗口勾選Z，進入三維圖像采集模式。 

3、點擊Reset按鈕，清除之前的記錄。 

4、Live或Find mode預覽，邊觀察圖像邊調節焦面（微調模式），點擊Top按鈕，確定三維圖像的頂面。 

5、繼續預覽，反方向調節焦面，信號增強再減弱，點擊Bottom按鈕，確定三維圖像的底面，停止預覽。 

6、輸入Step 

7、根據需要，勾選Save to File，在保存的同時獲取圖像。 

8、點擊Run now，開始采集Z序列圖像。

Top、Bottom、Step的選擇 

Step的右側顯示了當前成像參數下的系統推薦值（最小值），這個值是共聚焦顯微鏡光切厚度的1/2。如果按推薦值掃描，每個信息掃描2遍，每次50%的overlap，后期創建三維結構更精細；按推薦值的兩倍掃描，所有信號都采集1遍，也沒有丟失信息，大于2倍則會丟失一些圖像信息。我們建議step設置為推薦值的1-2倍之間。

top和bottom的設置與實驗目的有關，如果為了觀察三維結構，top和bottom設置時預覽狀態最好信號完全消失，保證結構的完整性；如果僅為了觀察Z軸投影圖，top和bottom可以設置在信號開始不清晰的焦面，節約采集時間。 

是不是很簡單，快來試一試吧！ 

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