作者：馮倩倩 

激光片層掃描顯微鏡（Light SheetFluorescence Microscopy）是一種新型顯微系統，具有成像速度快、多視角成像、成像視野大、觀察時間長等優點，可以對斑馬魚、果蠅、線蟲、擬南介等熒光標記的模式生物進行長時間觀察；同時，該設備具有光損傷小、光毒性和光漂白性小等特點，適合胚胎形成過程中器官發育基因表達的時間、空間模式熒光成像。還可利用熒光標記，測定樣本快速動態變化，固定樣本的快速精細三維結構成像，如：透明化的小鼠胚胎、腦、肺、肝臟、腎臟、胰腺、卵巢等組織器官的實時成像。 

一、confocal microscope和lightsheet microscope的區別 

傳統激光掃描共聚焦顯微鏡和激光片層掃描顯微鏡在成像原理、樣品制備、載物形式、適用樣品等方面均有較大不同，見下圖。

Confocal和lishtsheet原理及lightsheet載物臺 

二、lightsheet樣品制備方法 

1. 包埋 Embedded Samples 

可以將部分樣品包埋在1-4%濃度的低熔點瓊脂糖中，不同濃度的瓊脂糖其穩定性不同，對活體樣品的影響也不同。 

適合樣品：斑馬魚、果蠅、線蟲、擬南介等熒光標記的模式生物。 

包埋尺寸：平臺配有不同規格的毛細管和1ml注射器，樣品大小0.23mm-3.06mm，介于毛細管和注射器直徑的1/3-2/3之間，此時穩定性和成像效率均比較高。

包埋樣品合適尺寸 

2. 懸掛 Hanging Samples 

大組織透明化樣品可以通過懸掛的方式放置在樣品載物臺上，樣品最大尺寸是1cm*1cm*1cm。 

適合樣品：水溶性試劑透明化的小鼠胚胎、腦、肺、肝臟、腎臟、胰腺、卵巢等。 

上樣方式：平臺配有不同形式的樣品粘托和樣品托盤，可以將樣品通過粘貼懸掛或者托掛的方式放置在載物臺上，沒有固定形式，大家集思廣益。

懸掛樣品模式圖

懸掛樣品實物圖 

3. 圍封 Enclosed Samples 

由于高濃度的瓊脂糖濃度會影響部分活體樣本的發育和狀態，瓊脂糖濃度太低又會影響樣品的穩定性，此時，我們可以選擇將樣品圍封在FEP管中。 

適合樣品：折射率和FEP、瓊脂糖相似的樣品，如斑馬魚、果蠅、線蟲、擬南介等。 

樣品大小：平臺配有不同規格的FEP管，具體圍封方式類似于包埋方式。

圍封樣品模式圖

lightsheet樣品制備的方法很多，不同尺寸的樣品對應不同的處理方法，適用但不局限于以上介紹的方法，大家如需試用，還需集思廣益，開放思維。但其好處也是多多，成像視野大、拍照速度快、光漂白性小、觀察時間長，不妨也來試試吧！ 

本文所有圖片均來自今年lightsheet培訓講座的內容，感謝Zeiss公司對平臺培訓工作的支持！ 

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